การพัฒนาชุดตรวจอีไลซาด้วยรีคอมบิแนนท์โปรตีนที่ปรับเปลี่ยนรหัสโคดอนที่ผลิตจากเอสเชอริเชีย โคไลสำหรับวินิจฉัยการติดเชื้อ Coxiella burnetii ในแพะ

บทคัดย่อ

แพะเป็นพาหะของเชื้อ Coxiella burnetii ที่สำคัญที่จะนำเชื้อสู่คน จึงควรให้ความสำคัญในการเฝ้าระวัง ควบคุม และป้องกันการติดเชื้อ อย่างไรก็ตามข้อมูลทางด้านระบาดวิทยาของการติดเชื้อในแพะในประเทศไทยยังมีอยู่อย่างจำกัด ปัจจุบันการวินิจฉัยการติดเชื้อทางซีรัมวิทยาเพื่อตรวจคัดกรองสัตว์ที่ติดเชื้อยังต้องอาศัยชุดตรวจเชิงพาณิชย์ที่นำเข้าจากต่างประเทศ ทำให้ต้นทุนการตรวจค่อนข้างสูง โครงการนี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาความชุกของการติดเชื้อ C. burnetii ในแพะ และนำเทคโนโลยีชีวภาพมาพัฒนาชุดตรวจทางซีรัมวิทยา รวมถึงทดสอบประสิทธิภาพของชุดตรวจที่ได้ โดยทำการตรวจตัวอย่างซีรัมแพะจำนวน 947 ตัวอย่าง จาก 101 ฟาร์ม ด้วยชุดทดสอบ enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) เชิงพาณิชย์ และคำนวณหาความชุกของการติดเชื้อระดับตัวและระดับฟาร์ม ทำการสังเคราะห์ลำดับเบสของยีนเป้าหมายสำหรับการผลิตโปรตีน Com1 และ GroEL นำมาศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการกระตุ้นการสังเคราะห์โปรตีนด้วย E. coli จากนั้นนำโปรตีนที่ได้ไปทดสอบการทำปฏิกิริยาของโปรตีนกับแอนติบอดีของสัตว์ที่ติดเชื้อ ก่อนนำโปรตีนที่สามารถทำปฏิกิริยากับแอนติบอดีได้ไปพัฒนาชุดทดสอบ ELISA และทดสอบประสิทธิภาพของชุดทดสอบที่ได้เปรียบเทียบกับผลจากชุดทดสอบเชิงพาณิชย์ ผลการศึกษาพบว่าความชุกของการติดเชื้อในระดับตัวและระดับฟาร์มเท่ากับ 22.39% และ 58.42% ตามลำดับ ลำดับเบสที่สังเคราะห์ขึ้นสามารถใช้ในการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน Com1 และ GroEL ด้วย E. coli ได้ โดยความเข้มข้นของ IPTG ที่เหมาะสมในการกระตุ้นการสร้างโปรตีนทั้ง 2 ชนิด คือ 0.01 ถึง 1 มิลลิโมลาร์ และเริ่มพบการผลิตโปรตีนตั้งแต่ 1 ชั่วโมง โดยมีการผลิตมากที่สุดที่ 4 ชั่วโมง หลังผ่านการทำให้บริสุทธิ์ โปรตีนทั้ง 2 ชนิดสามารถทำปฏิกิริยากับแอนติบอดีของสัตว์ที่ติดเชื้อได้ เมื่อนำไปพัฒนาชุดทดสอบ ELISA พบว่าปริมาณของโปรตีน Com1 และ GroEL ที่เหมาะสมในการเคลือบแต่ละหลุมเท่ากับ 0.15 และ 0.01 ไมโครกรัม ตามลำดับ ตัวอย่างซีรัมที่จะนำมาตรวจควรเจือจางที่ 1:50 และวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตร โดยค่าตัดสินผลบวกที่เหมาะสมเท่ากับ 0.057 ผลการทดสอบ intra-assay มีค่า %CV เท่ากับ 6.26, 6.85 และ 9.78 ส่วนค่า %CV ของการทดสอบ inter assay เท่ากับ 7.63 การศึกษาประสิทธิภาพของชุดทดสอบที่พัฒนาขึ้นพบว่าค่าความไวและความจำเพาะเท่ากับ 57.56% และ 91.30% ตามลำดับ และมีค่า Kappa value เท่ากับ 0.52

คำสำคัญ

ระดับความพร้อมของโครงการ