การทำให้บริสุทธิ์และศึกษาคุณลักษณะของโปรตีนต้านจุลชีพที่ผลิตจากสายพันธุ์แบคทีเรียที่แยกได้จากอาหารหมัก

บทคัดย่อ

จุดประสงค์ของการศึกษานี้คือการทำให้แบคเทอริโอซินที่ผลิตจากแบคทีเรีย Bacillus spp. เพื่อนำไปใช้สำหรับการควบคุมแบคทีเรียก่อการเน่าเสียและแบคทีเรียก่อโรคในอาหาร จากผลการทดลองพบแบคทีเรียไม่ก่อโรคสายสายพันธุ์ที่สามารถผลิตแบคเทอริโอซินได้ คือ Bacillus subtilis T8434 and Bacillus velezensis T8448 ซึ่งสภาวะที่เหมาะสมในการผลิตแบคเทอริโอซินคืออุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เขย่าด้วยความเร็ว 200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 16 ชั่วโมงสำหรับ B. velezensis T8448 และ 20 ชั่วโมงสำหรับ B. subtilis T8434 คุณลักษะพื้นฐานของแบคเทอรืโอซินทั้ง 2 ชนิด คือสามารถทนความร้อนที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ถูกย่อยสลายได้อย่างสมบูรณ์ด้วยเอนไซม์ย่อโปรตีนคือ เอนไซม์โปรติเนสเค และเป็นโปรตีนประจุลบ ขั้นตอนการทำบริสุทธิ์ที่ค้นพบในการทดลองนี้แบ่งเป็น 4 ขั้นตอน ได้แก่ (1) การจับกันของส่วนที่ไม่ชอบน้ำโดย Amberlite XAD (2) การกำจัดเกลือโดย dialysis (3) การทำให้เข้มข้นด้วยวิธี อัลตร้าฟิวเตชั่น และ (4) วิธี reverse-phase high-performance liquid chromatography (reverse-phase HPLC) และจากการศึกษาโดย SDS-PAGE แบคเทอริโอซินทั้งสองชนิดมีขนาดเล็กกว่า 10 กิโลดัลตัน นอกจากนี้พบว่าแบคเทอริโอซินจาก B. subtilis T8434 มีประสิทธิภาพในการยับยั้งเชื้อได้ดีกว่าแบคเทอริโอซินจาก B. velezensis T8448 โดยแบคเทอริโอซินจาก B. subtilis T8434 สามารถยับยั้งแบคทีเรียแลคติกที่ก่อการเน่าเสียได้ดีโดยเฉพาะ และยับยั้งแบคทีเรียก่อโรคหลายสายพันธุ์ ได้แก่ Listeria monocytogenes Bacillus cereus Enterococcus faecium แต่ยังไม่พบการยับยั้งต่อแบคทีเรียแกรมลบ และแบคเทอริโอซินที่ได้สามารถต้านทานจุลินทรีย์ก่อการก่อโรค คือ Bacillus cereus ในเต้าหู้ และชละการเน่าเสียของเส้นก๋วยเตี๋ยวและเต้าหู้ได้

คำสำคัญ

ระดับความพร้อมของโครงการ